تراکم سنج سلولی
به روز رسانی شده در ۱۴۰۵/۳/۲۱ زمان مطالعه 10 دقیقه
شکل 1: اسپکتروفتومتر برای اندازه گیری od600 و چگالی سلولی.
تعیین غلظت سلول ها در یک نمونه برای بسیاری از کاربردهای مختلف بسیار مهم است. در حالی که به ظاهر ساده است، توانایی اندازه گیری غلظت ها به طور دقیق و دقیق برای دستیابی به بازده بالا و کیفیت مناسب در بسیاری از فرآیندهای مختلف بیولوژیکی و دارویی بسیار مهم است. تراکم سنج سلولی این اندازه گیری ها را به سرعت و کارآمد انجام می دهد و در آزمایشگاه ها و سایت های تولید در سراسر جهان استفاده می شود.
نمایش تمام سازندگان تراکم سنج سلولی
تئوری عملیات
تراکم سنج سلولی در رشته های علمی مانند میکروبیولوژی، بیوتکنولوژی و زیست شناسی مولکولی بسیار مهم است. این ابزارهای پیچیده برای اندازه گیری دقیق تراکم سلول ها در یک نمونه طراحی شده اند. عملکرد آنها به ویژگیهای نوری ذاتی سوسپانسیونهای سلولی بستگی دارد و روشی غیرتهاجمی و کارآمد برای ارزیابی غلظت سلول ارائه میکند.
مکانیسم اصلی تراکمسنج سلولی شامل اندازهگیری کدورت یا درجه تیرگی در یک سوسپانسیون سلولی است. این امر با هدایت یک پرتو کنترل شده نور از طریق نمونه حاصل می شود. همانطور که نور از سوسپانسیون عبور می کند، با سلول هایی مواجه می شود که نور را در جهات مختلف جذب و پراکنده می کنند. میزان جذب و پراکندگی نور نشانگر مستقیم غلظت سلولی در سوسپانسیون است. هر چه تعداد سلولها بیشتر باشد، نور بیشتری پراکنده میشود که منجر به کاهش شدت نوری میشود که از نمونه عبور میکند.

شکل 2: کدورت باکتری در آب پپتون.
پس از عبور نور از سوسپانسیون سلولی، به یکی از اجزای مهم متر، ردیاب نوری می رسد. این عنصر وظیفه اندازه گیری شدت نور عبوری را بر عهده دارد. به عبارت ساده، کاهش شدت نور اندازه گیری شده توسط ردیاب نوری با افزایش غلظت سلول ارتباط دارد. برای اطمینان از دقت و قابلیت اطمینان، دانسیته سنج سلولی با استانداردهایی کالیبره شده است که سطح کدورت مشخصی دارند. این کالیبراسیون امکان تبدیل قرائتهای ردیاب نور خام را به معیارهای معنیدار، مانند واحدهای چگالی نوری (OD) میدهد. واحدهای OD یک معیار مرسوم و پذیرفته شده برای غلظت سلولی در مطالعات مختلف بیولوژیکی هستند.
وقتی صحبت از ابزارهای علمی مدرن می شود، تراکم سنج سلولی برای ترکیب ریزپردازنده های پیشرفته تکامل یافته است. این ریزپردازندهها فرآیند تفسیر دادهها را خودکار میکنند و قرائتهای آشکارساز نوری را به اندازهگیریهای چگالی سلولی فوری و دقیق تبدیل میکنند. آنها نه تنها می توانند این اندازه گیری ها را در زمان واقعی نمایش دهند، بلکه می توانند داده ها را برای تجزیه و تحلیل بعدی ذخیره کنند. این قابلیت اتوماسیون و پردازش داده ها به طور قابل توجهی کارایی و قابلیت استفاده سنج های تراکم سلولی را در تنظیمات آزمایشگاهی افزایش می دهد.
مشخصات
مشخصات دانسیته سنج های سلولی بسته به مدل و سازنده می تواند متفاوت باشد، اما چندین مشخصات رایج وجود دارد که به ویژه با عملکرد و کاربرد آنها مرتبط است. درک این مشخصات برای انتخاب ابزار مناسب برای نیازهای آزمایشگاهی خاص بسیار مهم است. در اینجا جزئیاتی از مشخصات کلیدی آورده شده است:
محدوده اندازه گیری
این به محدوده غلظت سلولی اشاره دارد که متر می تواند با دقت اندازه گیری کند، که معمولاً در واحدهای OD بیان می شود. محدوده وسیع تر، کاربردهای متنوع تر، از تراکم سلولی کم تا بالا را امکان پذیر می کند.
طول موج نور
طول موج منبع نور استفاده شده در متر بسیار مهم است زیرا بر حساسیت و دقت اندازه گیری ها تأثیر می گذارد. طول موج های معمول در طیف نور مرئی هستند، اغلب حدود 600 نانومتر، که برای اکثر انواع سلول مناسب است.
قطعنامه
وضوح نشان دهنده کوچکترین تغییر در چگالی سلولی است که متر می تواند تشخیص دهد. وضوح بالاتر امکان اندازه گیری دقیق تری را فراهم می کند، که برای تجزیه و تحلیل دقیق و تحقیقات مهم است اما می تواند هزینه را نیز افزایش دهد.
دقت و دقت
اینها معیارهای عملکرد کنتور هستند. دقت به میزان نزدیک بودن اندازه گیری ها به چگالی واقعی سلول اشاره دارد، در حالی که دقت به ثبات اندازه گیری های مکرر اشاره دارد. هم دقت و هم دقت بالا برای داده های قابل اعتماد ضروری است.
حجم نمونه
این مشخصات مقدار نمونه مورد نیاز برای یک اندازه گیری را نشان می دهد. مترهایی که به حجم نمونه کمتری نیاز دارند، هنگام برخورد با نمونه های محدود یا گرانبها مفید هستند.
طول مسیر
طول مسیر مسافتی است که نور از نمونه طی می کند. برخی از مترهای تراکم سلولی طول مسیر قابل تنظیمی را برای تطبیق با تراکم سلولی و حجم نمونه متفاوت ارائه می دهند.
کالیبراسیون و استانداردها
اطلاعات در مورد نحوه کالیبراسیون متر و چه استانداردهایی استفاده می شود، مهم است. برخی از کنتورها دارای تنظیمات از پیش کالیبره شده هستند، در حالی که برخی دیگر ممکن است نیاز به کالیبراسیون کاربر با استانداردهای خاص داشته باشند.
خروجی داده و اتصال
این شامل نحوه نمایش، ذخیره و انتقال داده ها می شود. کنتورهای مدرن اغلب دارای نمایشگرهای دیجیتال، قابلیت های ذخیره سازی داده ها و گزینه هایی برای صادرات داده ها به رایانه یا شبکه از طریق USB، بلوتوث یا Wi-Fi هستند.
شرایط محیطی
مشخصات مربوط به محدوده دمای کارکرد، شرایط رطوبت و سایر عوامل محیطی که می توانند بر عملکرد کنتور تأثیر بگذارند.
هنگام انتخاب یک تراکم سنج سلولی، توجه به این مشخصات در زمینه کاربرد مورد نظر برای اطمینان از انتخاب یک ابزار مناسب و کارآمد ضروری است.

شکل 3: تراکم سنج مک فارلند.
انواع
در حالی که مترهای تراکم سلولی همگی عملکرد یکسانی را انجام می دهند، می توانند از روش های مختلفی استفاده کنند. برخی از انواع رایج تراکم سنج سلولی عبارتند از:
تراکم سنج سلولی اسپکتروفتومتری
تراکم سنج سلولی اسپکتروفتومتری به طور گسترده ای در آزمایشگاه ها برای اندازه گیری چگالی نوری کشت های سلولی استفاده می شود. آنها با هدایت یک پرتو نور در یک طول موج خاص، معمولاً در حدود 600 نانومتر، از طریق یک سوسپانسیون سلولی و اندازه گیری میزان نور جذب شده توسط سلول ها عمل می کنند. این روش به ویژه برای تعیین کمیت رشد کشت های باکتریایی و سایر میکروارگانیسم ها موثر است. این کنتورها دقت بالایی دارند و میتوانند طیف وسیعی از غلظتهای سلولی را کنترل کنند و به ابزاری استاندارد در تحقیقات میکروبیولوژیکی و بیوشیمیایی تبدیل شوند.
تراکم سنج سلولی کدورت سنجی
مترهای کدورت سنجی کدورت یا کدورت سوسپانسیون سلولی را اندازه گیری می کنند که با غلظت سلولی ارتباط دارد. آنها با ارزیابی کاهش انتقال نور از طریق نمونه به دلیل پراکندگی توسط سلول ها کار می کنند. این نوع متر معمولاً در آزمایشگاه های میکروبیولوژی برای ارزیابی سریع رشد باکتری ها استفاده می شود. سهولت استفاده و اندازهگیریهای سریع را ارائه میدهد و برای بررسیهای معمول و نظارت بر فرهنگها ایدهآل است.
تراکم سنج سلولی فلورومتریک
فلورومتریک از اصل فلورسانس برای اندازه گیری تراکم سلولی استفاده می کند. سلولهای برچسبگذاری شده با رنگهای فلورسنت پس از تحریک، نور ساطع میکنند و شدت این فلورسانس برای تعیین غلظت سلول اندازهگیری میشود. این مترها به ویژه در کاربردهایی که سلولها با نشانگرهای فلورسنت برچسبگذاری میشوند، مانند برخی تحقیقات بیوتکنولوژیکی و زیست پزشکی مفید هستند. حساسیت و ویژگی بالای آنها آنها را برای تشخیص و اندازه گیری غلظت های پایین سلول ها عالی می کند.
تراکم سنج سلولی نفلومتریک
متر نفلومتریک بر روی اندازه گیری پراکندگی نور توسط ذرات در یک نمونه تمرکز می کند. شدت نور پراکنده نشانگر غلظت سلول است. این روش برای اندازه گیری رشد سلولی در بیورآکتورها موثر است و به ویژه برای سوسپانسیون های سلولی رقیق مفید است. نفلومتری یک تکنیک ارزشمند در فرآیندهای تخمیر صنعتی و برای کاربردهایی است که نیاز به اندازهگیری غلظتهای سلولی کم تا متوسط دارند.
شمارنده های سلولی و تراکم سنج های خودکار
شمارنده های سلولی و تراکم سنج های خودکار ابزارهای پیشرفته ای هستند که از تجزیه و تحلیل تصویر و سایر فناوری های خودکار برای شمارش سلول و اندازه گیری تراکم استفاده می کنند. این دستگاهها برای محیطهای با توان بالا، مانند صنایع داروسازی و آزمایشگاههای تحقیقاتی بزرگ، که در آنها پردازش تعداد زیادی از نمونهها بهطور کارآمد بسیار مهم است، ایدهآل هستند. آنها درجه بالایی از اتوماسیون را ارائه می دهند که هم دقت و هم کارایی را تضمین می کند، به ویژه در محیط های شلوغ یا صنعتی که اندازه گیری های دستی وقت گیر و غیر عملی است.
هر کدام از این تراکمسنجهای سلولی دارای ویژگیها و عملکردهای متمایزی هستند که نیازها و کاربردهای مختلف در تحقیقات علمی و صنعت را برآورده میکنند. انتخاب یک نوع خاص به نیازهای آزمایشی، ماهیت نمونهها و میزان دقت و راحتی مطلوب بستگی دارد.

شکل 4: شمارش سلولی با استفاده از شمارنده سلولی خودکار Biorad TC-10.
ویژگی ها
ویژگی های تراکم سنج سلولی بسته به نوع و مدل می تواند بسیار متفاوت باشد. هر ویژگی برای پاسخگویی به نیازهای خاص در تحقیقات علمی و کاربردهای صنعتی طراحی شده است. در اینجا نگاهی دقیق تر به برخی از ویژگی های متمایز در انواع مختلف سنج تراکم سلولی آورده شده است:
انتخاب طول موج
بسیاری از دانسیتهسنجهای سلولی اسپکتروفتومتری امکان انتخاب طول موجهای مختلف را فراهم میکنند که انواع سلولها و الزامات تجربی را در خود جای میدهند. مدل های پیشرفته ممکن است طیف وسیعی از طول موج ها را ارائه دهند که تطبیق پذیری آنها را افزایش می دهد. نمونه های مختلف بهتر به طول موج های مختلف پاسخ می دهند و این ویژگی را به ویژه برای انواع سلول های خاص مفید می کند.
کنترل خودکار نمونه
برخی از شمارندههای سلولی خودکار و تراکمسنجها از کنترل خودکار نمونه استفاده میکنند که میتواند شامل فوکوس خودکار، نمونهبرداری خودکار و حتی تمیز کردن خودکار باشد. این اتوماسیون به طور قابل توجهی مداخله دستی را کاهش می دهد و تکرارپذیری و کارایی را به ویژه در تنظیمات با توان بالا افزایش می دهد.
کنترل و جبران دما
دما می تواند به طور قابل توجهی بر اندازه گیری تراکم سلول تأثیر بگذارد. برخی از کنتورها دارای سیستمهای کنترل دما یا ویژگیهای جبران دما هستند که اندازهگیری دقیق را در شرایط محیطی متفاوت تضمین میکنند.
صفحه نمایش و رابط کاربری
رابط کاربری و نمایشگر برای سهولت استفاده بسیار مهم هستند. بسیاری از مترها دارای رابطهای لمسی بصری، نمایشگرهای دیجیتال شفاف و نرمافزار کاربرپسند هستند که حتی برای کاربرانی با حداقل آموزش قابل دسترسی هستند.
دوام و قابل حمل بودن
کنتورهای قابل حمل و دستی به گونه ای طراحی شده اند که بادوام بوده و اغلب دارای ساختاری ناهموار برای تحمل شرایط مزرعه هستند. اندازه جمع و جور و عملکرد باتری آنها را برای اندازه گیری در محل ایده آل می کند.
سفارشی سازی و مقیاس پذیری
مترهای سطح بالا ممکن است گزینه های سفارشی سازی را برای تامین تنظیمات آزمایشی خاص یا فرآیندهای صنعتی ارائه دهند. این میتواند شامل پیکربندیهای مقیاسپذیر برای رسیدگی به ظرفیتهای نمونه بزرگتر یا ادغام با سایر تجهیزات آزمایشگاهی باشد.
فناوری های تشخیص پیشرفته
فلورومتریک و نفلومتریک، به ویژه، ممکن است از فناوری های تشخیص پیشرفته، از جمله آشکارسازهای بسیار حساس و اپتیک های پیچیده، برای اطمینان از دقت و حساسیت در سناریوهای اندازه گیری چالش برانگیز استفاده کند.
ویژگیهای تراکمسنجهای سلولی به طور مداوم با پیشرفتهای فناوری در حال تغییر است و نیازهای رو به رشد و متنوع تحقیقات علمی و کاربردهای صنعتی را برآورده میکند. هنگام انتخاب یک تراکم سنج سلولی، مهم است که این ویژگی ها را در زمینه نیازهای خاص برنامه مورد نظر در نظر بگیرید.

شکل 5: دیلوفتومتر OD600 برای اندازه گیری تراکم سلولی رشد مخمر باکتریایی سنجش برادفورد.
ساخت
فرآیند تولید تراکم سنج سلولی شامل چندین مرحله پیچیده و رعایت استانداردهای دقیق کیفیت است که اطمینان حاصل می کند که محصول نهایی دقیق، قابل اعتماد و مناسب برای استفاده در محیط های مختلف علمی و صنعتی است. مراحل اصلی تولید عبارتند از:
طراحی و مهندسی
انتخاب جزء
مدار و سیستم عامل
مونتاژ سیستم نوری
نمونه ساخت اتاقک
کالیبراسیون
این فرآیند با مرحله طراحی و مهندسی آغاز می شود، جایی که دانشمندان و مهندسان مشخصات متر را توسعه می دهند. این شامل تصمیم گیری در مورد نوع (به عنوان مثال، اسپکتروفتومتری، کدورت)، محدوده طول موج، وضوح، دقت، و ویژگی های اضافی مانند اتصال یا کنترل خودکار نمونه است.
سپس اجزای کلیدی مانند منابع نور (LED، لیزر)، آشکارسازهای نوری، اجزای نوری (عدسیها، آینهها)، مدارهای الکترونیکی و ریزپردازندهها بر اساس مشخصات طراحی انتخاب میشوند. انتخاب مواد و اجزای سازنده برای عملکرد و طول عمر متر بسیار مهم است.
مدارهای الکترونیکی در مرحله بعد طراحی و مونتاژ می شوند. این شامل یکپارچه سازی ریزپردازنده و برنامه ریزی آن برای اکتساب، پردازش و کنترل رابط کاربر است. سپس سفتافزار برای مدیریت عملکردهای کنتور، تجزیه و تحلیل دادهها و گزینههای اتصال توسعه مییابد.
سیستم نوری، که قلب سنج تراکم سلولی است، در مرحله بعدی مونتاژ می شود. این شامل تنظیم دقیق منبع نور، محفظه نمونه و ردیاب نوری است تا اطمینان حاصل شود که مسیر نور به درستی ایجاد شده است. برای اطمینان از اندازه گیری های دقیق و منسجم، اجزای نوری باید دقیقاً در یک راستا قرار گیرند.
محفظه نمونه برای نگهداری سوسپانسیون سلولی طراحی شده است. باید از موادی ساخته شود که نسبت به طول موج های خاص نور مورد استفاده غیر واکنش، بادوام و شفاف باشند. در برخی از طرح ها، محفظه می تواند با دما کنترل شود یا برای کنترل حجم های مختلف نمونه مجهز شود.
هنگامی که سیستم نوری و اجزای الکترونیکی مونتاژ می شوند، در یک واحد ادغام می شوند. سپس در محفظه ای قرار می گیرد که معمولاً برای دوام، سهولت استفاده، و در مورد کنتورهای قابل حمل، سبک و فشرده طراحی شده است.
سپس کنتورهای مونتاژ شده کالیبره شده و به شدت مورد آزمایش قرار می گیرند تا اطمینان حاصل شود که مشخصات مورد نیاز برای دقت، دقت و برد را برآورده می کنند. کالیبراسیون اغلب با استفاده از استانداردهایی با خواص نوری شناخته شده انجام می شود.
فرآیند تولید تراکم سنج سلولی ترکیبی از مهندسی دقیق، علوم نوری، الکترونیک و توسعه نرم افزار است. تولیدکنندگان باید استانداردهای بالای کیفیت و دقت را رعایت کنند، زیرا این ابزارها در تحقیقات حیاتی و کاربردهای صنعتی استفاده میشوند که در آن دقت در اولویت است.
برنامه های کاربردی
تراکم سنج سلولی ابزار همه کاره ای است که در زمینه های مختلف علمی و صنعتی مورد استفاده قرار می گیرد. وظیفه اصلی آنها اندازه گیری غلظت سلول ها در یک نمونه است و این قابلیت کاربردهای زیادی پیدا می کند:
میکروبیولوژی
در میکروبیولوژی، تراکمسنج سلولی برای نظارت بر رشد باکتریها، مخمرها و سایر کشتهای میکروبی ضروری است. آنها به تعیین زمان بهینه برای برداشت سلول ها، تست حساسیت آنتی بیوتیکی و ارزیابی اثرات شرایط مختلف رشد کمک می کنند.
بیوتکنولوژی
در بیوتکنولوژی از این مترها در توسعه و بهینه سازی فرآیندهای تخمیر استفاده می شود. آنها به نظارت بر رشد سلول در بیورآکتورها کمک می کنند و اطمینان می دهند که شرایط برای تولید محصولات بیوتکنولوژیکی مانند آنزیم ها، واکسن ها و سوخت های زیستی ایده آل است.
تحقیقات بالینی و تشخیصی
تراکم سنج سلولی در کاربردهای مختلف تحقیقات بالینی، مانند مطالعه الگوهای رشد سلولهای سرطانی، ارزیابی اثرات داروها بر تکثیر سلولی، و در آزمایشهای تشخیصی خاصی که نیاز به شمارش سلولی دارند، کمک میکند.
صنعت داروسازی
در تولید دارو، به ویژه در تولید بیوداروها، از متر تراکم سلولی برای اطمینان از ثبات و کیفیت محصولات حاصل از کشت سلولی استفاده می شود. تراکم سنج سلولی به طور معمول در تولید استفاده می شود.
صنایع غذایی و آشامیدنی
آنها در صنایع غذایی و آشامیدنی برای نظارت بر رشد میکروبی در محصولات غذایی و نوشیدنی ها استفاده می شوند. این برای کنترل کیفیت، تضمین ایمنی و ماندگاری محصولات بسیار مهم است.
تست کیفیت آب
تراکم سنج سلولی در پایش محیطی، به ویژه در آزمایش کیفیت آب استفاده می شود. آنها به شناسایی و تعیین کمیت آلودگی میکروبی در منابع آب کمک می کنند.
صنعت آبجوسازی
در آبجوسازی، تراکم سنج سلولی به نظارت بر غلظت و فعالیت مخمر در طول تخمیر کمک می کند، که برای دستیابی به طعم و محتوای الکل مورد نظر در آبجو و سایر نوشیدنی های الکلی حیاتی است.
کشاورزی و علوم گیاهی
در علوم گیاهی، از آنها برای اندازه گیری تراکم ریزجلبک ها و سایر سلول های گیاهی در تحقیقات مربوط به انرژی زیستی، مکمل های غذایی و علوم محیطی استفاده می شود.
کاربردهای تراکم سنج سلولی متنوع است و در چندین صنعت و حوزه تحقیقاتی گسترده است. توانایی آنها برای اندازه گیری سریع، دقیق و غیر تهاجمی غلظت سلولی، آنها را در هر زمینه ای که با کشت سلولی کار می کند ضروری می کند.

شکل 6: تنفس سنج.
استانداردها
تراکم سنج سلولی تابع استانداردهای مختلفی است، به ویژه از نظر کالیبراسیون، دقت و استفاده. این استانداردها اطمینان میدهند که اندازهگیریهای بهدستآمده از این ابزارها قابل اعتماد و سازگار هستند، که در تحقیقات علمی، تشخیص بالینی و کاربردهای مختلف صنعتی بسیار مهم است. در حالی که ممکن است استانداردهای خاص جهانی برای دانسیته سنج سلولی مانند سایر تجهیزات آزمایشگاهی وجود نداشته باشد، چندین استاندارد و روش عمومی معمولاً رعایت می شود:
قابلیت ردیابی NIST
در ایالات متحده، موسسه ملی استاندارد و فناوری (NIST) استانداردهای ردیابی را ارائه می دهد. ابزارهایی مانند تراکم سنج سلولی اغلب با استفاده از استانداردهای قابل ردیابی به NIST کالیبره می شوند تا اطمینان حاصل شود که اندازه گیری ها دقیق هستند و می توان آنها را به استانداردهای ملی ردیابی کرد.
اقدامات آزمایشگاهی خوب (GLP)
استانداردهای GLP، اگرچه مختص هیچ نوع تجهیزاتی نیستند، اما در آزمایشگاهها برای اطمینان از کیفیت و یکپارچگی دادهها حیاتی هستند. این شیوه ها جنبه هایی مانند کالیبراسیون، نگهداری و بهره برداری از تجهیزات، از جمله تراکم سنج سلولی را پوشش می دهد.
استانداردهای داروسازی
در صنعت داروسازی، استانداردهای تعیین شده توسط ارگان هایی مانند داروسازی ایالات متحده (USP) و داروسازی اروپایی (EP) مرتبط هستند. این استانداردها ممکن است الزامات خاصی را برای ابزارهای مورد استفاده در تحقیقات و تولید دارویی، از جمله دقت و معیارهای دقیق، دیکته کنند.
دستورالعمل های CLSI
موسسه استانداردهای بالینی و آزمایشگاهی (CLSI) دستورالعمل هایی را ارائه می دهد که ممکن است برای تراکم سنج سلولی مورد استفاده در تنظیمات بالینی قابل اجرا باشد. این دستورالعملها جنبههای کالیبراسیون، اعتبارسنجی و کنترل کیفیت را پوشش میدهند.
استانداردهای سازنده
سازندگان تراکم سنج سلولی نیز استانداردها و مشخصات خود را برای عملکرد، کالیبراسیون و نگهداری ابزار خود تعیین می کنند. این استانداردها اغلب با استانداردهای بین المللی و ملی همسو می شوند یا از آن فراتر می روند تا کیفیت و انطباق را تضمین کنند.
توجه به این نکته مهم است که اگرچه ممکن است استانداردهای جهانی به طور خاص برای سنج تراکم سلولی وجود نداشته باشد، اصول کلی دقت، دقت، کالیبراسیون و قابلیت ردیابی به طور جهانی در مناطق و صنایع مختلف اعمال می شود. آزمایشگاه ها و تنظیمات صنعتی معمولاً از این استانداردها پیروی می کنند تا از قابلیت اطمینان و اعتبار اندازه گیری ها و نتایج تحقیقات خود اطمینان حاصل کنند.
منبع

